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冷凍組織研磨儀研磨三七提取DNA實(shí)驗(yàn)詳細(xì)步驟

作者:上海測(cè)博 文章來(lái)源:上海測(cè)博 發(fā)布時(shí)間:2020-08-18 點(diǎn)擊數(shù): 214

三七樣品中提取DNA,中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院之前采用研缽手工研磨的方法,在研缽內(nèi)倒入液氮,在凍干狀態(tài)下快速研磨,研磨過(guò)程中樣品不易研磨,整體研磨樣品不充分,影響實(shí)驗(yàn)效果,因此選擇冷凍組織研磨儀

三七是我國(guó)重要的藥用植物之一,又名田七,人參三七等,為五加科人參屬植物,是我國(guó)傳統(tǒng)名貴藥物,自古就有“止血神藥”的美稱(chēng)。距今已有400多年的應(yīng)用歷史,在國(guó)內(nèi)外久負(fù)盛名。三七主產(chǎn)于云南文山。品種缺乏是三七種植存在的重要技術(shù)問(wèn)題,育種標(biāo)記和方法則是困擾三七育種的重要問(wèn)題,這與我們對(duì)三七的遺傳基礎(chǔ)缺乏了解有關(guān)。

研究發(fā)現(xiàn),三七是在9100萬(wàn)年前與茄科植物馬鈴薯和辣椒分化開(kāi)來(lái),三七與四倍體的人參屬植物人參和西洋參有9383個(gè)共同的基因,976個(gè)特有的轉(zhuǎn)錄本.,基因組測(cè)序的完成將為三七全基因組選擇育種、功能基因的發(fā)現(xiàn)等提供了基礎(chǔ),也有利于三七產(chǎn)業(yè)關(guān)鍵技術(shù)問(wèn)題的解決。

一、實(shí)驗(yàn)材料和器具:

樣品:三七

工具:組織研磨儀

耗材:鋼罐,研磨珠、液氮、剪刀、鑷子等

實(shí)用儀器介紹:此款全新冷凍組織研磨儀,它是一種特殊的、快速的、高效率的、多試管的一致系統(tǒng)。可以在較短的時(shí)間內(nèi)、 低溫狀態(tài)下完成對(duì)各種樣品的研磨、粉碎、混合及細(xì)胞破壁,以保留蛋白質(zhì)活性。

二、實(shí)驗(yàn)步驟:

1、準(zhǔn)備鋼罐2個(gè),研磨珠若干顆;

2、取三七組織剪成小塊與研磨珠一同放入鋼罐中,將蓋子擰緊;

3、將鋼罐置于裝有液氮的容器內(nèi),液氮容量沒(méi)過(guò)鋼罐即可,冷凍若干分鐘,取出時(shí)戴手套或使用鑷子夾取避免液氮凍傷;

4、將適合器放入研磨儀器中固定好,然后開(kāi)機(jī)并將制冷功能打開(kāi)進(jìn)行預(yù)冷

5、將浸泡過(guò)液氮的鋼罐放置適合器內(nèi),樣品盡量對(duì)稱(chēng)放置,以保證研磨時(shí)的受力平衡,旋緊垂直定位螺旋,將安全鎖扣緊。設(shè)置參數(shù),程序結(jié)束后即可得到破碎粉末;

5、研磨完畢后請(qǐng)關(guān)閉電源,將安全鎖歸位;

6、完成后續(xù) DNA 提取步驟。

三、注意事項(xiàng):

1、每支鋼罐內(nèi)的樣品量一般不超過(guò)罐體體積的三分之二,樣品量過(guò)多會(huì)影響研磨效果。

2、樣品盡量對(duì)稱(chēng)放置,以保證研磨時(shí)的受力平衡。

3、樣品夾取過(guò)程中戴手套及使用鑷子夾取避免液氮凍傷。

四、實(shí)驗(yàn)過(guò)程、結(jié)果圖示:

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